ProSpec是一家全球细胞因子蛋白及相关抗体生产和研发品牌。ProSpec的生产和研发工厂位于以色列,专注于蛋白(重组及合成)生产研发,其独有的细菌和哺乳动物表达和蛋白折叠技术使其能在17年内成长为国际的科研级蛋白供应商。目前ProSpec可以提供细胞因子,生长因子,信号蛋白,病毒抗原等近800种重组蛋白和100多种抗体,是世界上提供蛋白品种多的公司之一,其生产工艺和规模使其可以提供毫克到克级蛋白,价格优于同类公司。绝大部分产品是天然成熟型蛋白,而不含有标签蛋白。考虑到大部分研究者希望能更灵活地配制蛋白溶液,ProSpec-Tany绝大部分产品没有添加保护剂或盐,这就对工艺提出了更高的要求。同时,ProSpec-Tany绝大部分产品为冻干粉,因此易于运输和保存。重组蛋白的生物学活性定义。ProSpecWnt3重组蛋白
哺乳动物蛋白表达系统在生产重组蛋白中的应用中,优势明显。具体表现为以下方面,能实现翻译后修饰及正确的蛋白折叠复性:哺乳动物为真核细胞,细胞器可以对蛋白正确折叠加工。表达水平高:载体可在哺乳动物细胞中高表达重组蛋白,表达量可高达1-3g/L。蛋白表达高效稳定:高效启动子控制,稳定表达,并可以选择多种表达,如瞬时表达、稳定细胞株表达、营养缺陷型细胞株表达(DHFR/GS)、大规模悬浮细胞表达等。适合大规模蛋白表达:常用的哺乳动物表达宿主细胞(HEK293和CHO),使用悬浮细胞培养,可以在一个月内可产生数克级蛋白。ProSpecWnt3重组蛋白外企的重组蛋白药物占据了全球将近60%的医药市场份额。
重组蛋白含与不含 CF 有什么区别?CF,是 Carrier Free 的意思。一般来说,为了对重组蛋白的结构及活性进行保护,生产厂家会在蛋白产品中添加牛血清白蛋白(BSA)作为载体蛋白。但考虑到 BSA 会对某些实验造成影响,厂家又研发出不含载体蛋白(BSA)的产品,即 Carrier Free 蛋白。客户如何选择呢?在用途上,一般情况下,我们建议使用含有 BSA 的重组蛋白用于细胞或组织培养,或作为 ELISA 标准品。相对而言,当 BSA 可能会干扰实验时,比如体内实验、蛋白标记等,则推荐使用 CF 蛋白。另外,如果实验平台有特殊要求,也应根据要求选择不含 BSA 的蛋白。
重组蛋白的活性低是让科研工作者十分头疼的难题,买来的重组蛋白活性低怎么办?除了重组蛋白自身存在质量问题外,它可能只是需要一个“搭档”。在某些重组蛋白在使用时,需要加入交联抗体,进行交联(Cross-linking)反应后才能表现出高活性,发挥出功能。其原理是,交联反应能够将重组蛋白的受体相互拉近,因为每个标签抗体含有两个抗原结合臂,从而能够使两个含标签蛋白 - 受体复合物拉近,进而指数级放大下游信号,提升刺激的效率(表现为更低的 ED50 值)。众所周知,在同一实验中 ED50 越低表明着活性越高。重组蛋白药物的发展动态。
重组蛋白的生化和生物学特性对于选择表达策略来说是必须要考虑的,可以通过它们对表达结果和产物的可溶性做出初步预测。通过分析一级序列可以整合一组属性用以预测二级结构、生物学定位 (细胞膜、细胞质、周质腔或胞外)、家族归类 (折叠和结构域) 及推断生化性质 (等电点、无序区域、配基)。目标蛋白质的一些特征,如极可能存在的跨膜螺旋,可能要求必须使用为表达膜蛋白设计的系统,或需要使用克隆单个结构域的策略以表达蛋白质的可溶部分。使用目标蛋白质的特征来指导表达宿主的选择和载体的构建有助于获得成熟的、定位适当的蛋白质。可以使用目标蛋白质或同源蛋白质的实验数据和历史数据对序列信息加以补充,从而有助于表达系统的进一步优化。例如,已知某蛋白质需要某种辅基以保持正确的功目旨,那就必须选择特定的宿主以确保获得具有完整功能的表达产物。国产重组蛋白种类多,性价比高。ProSpecWnt3重组蛋白
选择合适的重组蛋白表达系统,至关重要。ProSpecWnt3重组蛋白
客户购买的重组蛋白一般为装在塑料管中的冻干粉,冻干粉在运输过程中可能会因颠簸而漂散并粘贴于管壁或管盖上,所以在打开塑料瓶盖前,需将冻干粉通过离心收集到管底,以便用很小体积的液体即可将冻干粉完全溶解。那么应该用多少转速、多长时间离心试剂管,才能达到良好的收集效果?答:有些小型高速离心机(多为进口品牌)的面板上有一个Spin键,按了此键后,离心机会自动快速上升到速度(10000rpm或12000rpm),上升后速度即刻下降,直至停止旋转,整个过程大约30s。这个Spin键足以很好的将细胞因子或蛋白收集到管底。但有些实验室没有这样的高速离心机,只有转速为4000-4500rpm的离心机。这种情况下,需3000-3500rpm离心5min,也能达到类似的效果。ProSpecWnt3重组蛋白
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